常見的高效液相色譜問題及處理方法包括：柱壓、液漏、譜圖等，研創(chuàng)生物小編為您提供完善的解決方案。

一.柱壓

(1)柱壓過高

柱壓過高是HPLC柱客戶最常遇到的問題。原因有很多，往往不是柱子本身的問題。您可以按照以下步驟檢查問題的原因。

1.拆下保護柱，看柱壓是否還高，否則就是保護柱的問題，如果柱壓還高，再檢查一下；

2.把YMC從儀器上取出色譜柱，看壓力是否降低，否則管道堵塞，需要清洗，如果壓力降低，再檢查；

3.將柱子的進出口連接到儀器上，用10倍柱體積的流動相清洗柱子（此時不要連接探測器，以防止固體顆粒進入流動池）。此時，如果柱壓仍不降低，再次檢查；

4.更換柱入口篩板。如果柱壓降低，則表您的溶劑或樣品結晶沉淀或含有顆粒雜質。正是這些雜質阻塞了篩板，導致壓力上升。如果柱壓仍然很高，請聯(lián)系制造商。一般來說，在進樣器和保護柱之間連接在線過濾器可以防止柱壓過高的問題。

5.進樣閥損壞：清洗或更換進樣閥。

6.柱溫過低：提高溫度。

7.網上過濾器堵塞：清洗或更換網上過濾器。

8.流速設置過高：降低流速

9.壓力傳感器故障：更換液位傳感器。

(2)柱壓過低

1.液漏：確定液漏位置并進行維修。

2.液位傳感器損壞：更換液位傳感器。

3.泵頭內有氣體：溶劑除氣：.啟動泵抽出氣體。

4.流速設置過低：調節(jié)流速。

5.柱溫過高：降溫。

(3)壓力起伏

1.有溶解氣體流動；超聲波除氣15-30分鐘或充氦氣除氣

2.單向閥堵塞；取出單向閥，用超聲波在純水中超過20分鐘，到處堵塞物

3..泵密封損壞，導致壓力起伏；更換泵密封，更換泵密封

4..系統(tǒng)有液漏點；確定液漏位置并進行維修

5.柱后產生氣泡；流通池出口加負壓調節(jié)器

6.梯度洗脫：流動相粘度變化引起的壓力起伏。

二.液漏

(1)接口處的液體泄漏

1.接頭未擰緊；松開后再擰緊。手緊接頭受手力限制。不要使用工具。不銹鋼接頭先用手擰緊，然后用專用扳手擰緊1/4-1/2圈。注意接頭內的管道，否則會有死體積。

2.接頭被污染或損壞；建議更換接頭。

3.接頭不匹配，建議使用同品牌的配件。

(2)泵液泄漏

1.單向閥松動：擰緊或更換單向閥。

2.松開接頭：擰緊接頭。

3.混合器密封損壞：更換混合器密封或更換混合器。

4.泵密封損壞:檢修或更換泵密封。

5.液位傳感器損壞：檢修或更換液位傳感器。

6.脈沖阻尼器損壞：更換脈沖阻尼器。

7.比例閥損壞：檢查隔膜和手緊接頭，如液漏立即更換。

8.排氣閥損壞：擰緊排氣閥，若損壞，更換排氣閥。

(3)進樣閥漏液

1..轉子密封損壞；更換轉子密封。

2..定量環(huán)堵塞；清洗或更換定量環(huán)。

3.進樣口密封松動；調整松緊度。

4..進樣針尺寸不合適，一般過短；使用適當?shù)倪M樣針（注意針形）。

5.廢水管內產生虹吸；清空廢水管。

6.廢水管堵塞：更換或疏通廢水管。

(4)高效液相色譜柱液泄漏

1.尾部接頭松動：擰緊接頭。

2.卡套內有填料：拆下：.清洗卡套.重裝。

3.篩板厚度不合適：使用合適的篩板。

(5)檢測器液漏

1.流通池墊片損壞：防止背景壓力過大，更換墊片

2.流通池窗粉碎：更換窗口。

3.手緊接頭液漏：擰緊或更換。

4.廢水管堵塞：更換廢水管。

5.流通池堵塞：更換。

三.譜圖問題

(1)峰拖尾

1.篩板堵塞：反沖色譜柱.更換進口篩板。

2.色譜柱塌陷：添加色譜柱。

3..干擾物質的存在：使用較長的色譜柱.改變流動相或色譜柱。

4.流動相PH值不合適：調整PH值，對于偏堿化合物，低PH值更有利于獲得對稱峰。

5.樣品與填料表面的活性點發(fā)生反應：加入離子對試劑，如流動相中含有銨鹽加入堿揮發(fā)性裝飾劑，如三乙胺，然后用酸調整到原來的PH(建議使用非揮發(fā)性磷酸)。

在流動相中加入適當?shù)乃臍溥秽?，一般加入量?%以內。

7.酸性或偏堿化合物峰拖尾：使用50-100濃度mM緩沖液；使用流動相相的緩沖液；PH等于PKa的緩沖液。

8.樣品過載：減少進樣量。

(2)峰前延

1.柱溫低：上升柱溫，最好不要超過40℃。

2.樣品溶劑選擇不當：采用流動相作為樣品溶劑。

3.樣品過載：降低樣品含量。

4.色譜柱損壞：更換色譜柱。

5.流動相中緩沖鹽濃度不足：增加緩沖鹽濃度可增加離子強度，減少靜電作用引起的前拖。

在流動相中加入適當?shù)乃臍溥秽?，一般加入量?%以內。

(3)峰分叉

1.保護柱或分析柱污染：取出保護柱，然后進行分析。如有必要更換保護柱。如果分析柱堵塞，請拆卸并清洗。如果問題仍然存在，可能是柱被強力保留物質污染，并采取適當?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在，入口可能會堵塞，更換篩板或色譜柱。

2.樣品溶劑不溶于流動相：改變樣品溶劑，如有可能，以流動相為溶劑。

(4)峰值變形

樣品過載：減少到適當?shù)倪M樣量。

(5)早出的峰變形

1.進樣量不正確：減少進樣量。

2.樣品溶劑選擇不當：使用流動相作為溶劑或使用較弱的溶劑。

(6)早出峰尾水平大于晚出峰尾水平

柱外效應：使用時間較短.內徑較小的管道；使用小型流通池。

(7)K增加時，拖尾更嚴重

1.反相模式，二次保留效應：.加入三乙胺（堿性樣品）；加入乙酸（酸性樣品）；加入鹽或緩沖劑（離子樣品）；更換柱子。

2.正湘方式，二次保留效應：加入三乙胺（偏堿樣品）；加入乙酸（酸性樣品）；加水；

3.離子對，二次保留效應：加入三乙胺（偏堿樣品）。

(8)額外峰值

1.上次進樣洗脫峰：提高流速；增加運行時間或梯度斜率。

2.倒峰或鬼峰：檢查流動相是否純凈；使用流動相作為溶劑；減少進樣體積。

(9)保留時間起伏和突然變化

1.溫度控制不當；調整柱溫。

2.流動相成分變化；避免流動相揮發(fā).做梯度時，要特別注意流動相混合的對稱性

3.色譜柱不平衡；每次運行前給予足夠的時間平衡色譜柱。

4.流速變化：再次設置流速。

5.泵中含有氣泡：從泵中去除氣泡。

6.流動相選擇不當：更換合適的流動相。

(10)基線漂移

1.柱溫起伏：控制柱與流動相的溫度。

2.流動相不均：使用：HPLC水平溶劑、高純鹽和添加劑，流動相使用前除氣。

3.檢測器內的流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強性溶劑清洗流通池

4.檢測器出口堵塞：清除堵塞物或更換管道。

5.流動相配比不當或流速變化：改變配比或流速。

6.樣品含有強保留物質(高保留物質)K‘值）將饅頭的峰值樣品洗掉，然后顯示出逐漸上升的基線：必要時，在進樣或研究過程中定期用強溶劑清洗柱子。

7.檢測器未設置在最大吸收波長處：將波長調整到最大吸收波長處。

(11)分離度降低

1.流動相污染或變質(導致保留時間變化):重新配置流動相。

2.保護柱或分析柱堵塞：取出保護柱再分析，也可更換保護柱。如果分析柱堵塞，拆卸清洗，如果問題仍然存在，柱可能被強保留物污染，或入口堵塞，可以更換篩板或色譜柱。