高效液相色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)使用包括：安裝保護(hù)柱、過(guò)濾流動(dòng)相和樣品、凈化樣品、防止柱壓過(guò)高、注意溫度和pH值、正確及時(shí)清洗等。

一.加裝保護(hù)柱

保護(hù)柱的作用是過(guò)濾流動(dòng)相和樣品化學(xué)“拉圾”同時(shí)，還能有效去除流動(dòng)相和樣品中的不溶性物質(zhì)?，F(xiàn)在的色譜儀在流動(dòng)相吸入口.進(jìn)樣閥后部及色譜柱兩側(cè)均配有1個(gè).2μm不同孔徑的濾器只能去除不溶性顆粒，不能去除化學(xué)污染。因此，有必要安裝保護(hù)柱，特別是在分析中藥時(shí).中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品是保護(hù)分析柱不可缺少的措施。

保護(hù)柱填料應(yīng)與分析柱一致，粒度可大于分析柱。保護(hù)柱是一種耗材。經(jīng)過(guò)一定次數(shù)的樣品分析（50~100次）后，當(dāng)柱壓明顯上升或峰值變質(zhì)或基線漂移時(shí)，應(yīng)更換保護(hù)柱。

二.過(guò)濾流動(dòng)相和樣品

流動(dòng)相一般由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成。原則上，所有流動(dòng)相都應(yīng)通過(guò)色譜柱過(guò)濾，但在實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)具體情況有所不同：當(dāng)有機(jī)溶劑采用色譜純度、石英亞開(kāi)水或其他超純水時(shí)，過(guò)濾在保證水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量而不受污染時(shí)沒(méi)有更多的實(shí)際意義。

當(dāng)流動(dòng)相中含有緩沖鹽時(shí)，需要過(guò)濾。如前所述，緩沖溶液放置一段時(shí)間后根據(jù)環(huán)境溫度不同，夏季一般不超過(guò)48h,冬季一般不超過(guò)一周)，使用前應(yīng)再次過(guò)濾。

注入流路系統(tǒng)前，樣品試液應(yīng)經(jīng)0.45μm(0.22μm最好過(guò)濾孔徑濾膜。注意區(qū)分水系和油系，兩者不能混用，以免濾膜溶解造成污染。

裝有流動(dòng)相的器皿和色譜系統(tǒng)中的在線濾器應(yīng)定期清洗和更換，以防止濾器因過(guò)載而無(wú)法過(guò)濾。

三.凈化樣品

樣品中含有對(duì)色譜柱有害的化學(xué)成分，如永久吸附的蛋白質(zhì).糖和其他有機(jī)分子和強(qiáng)吸附物質(zhì)，以及可能破壞柱填料的基團(tuán)離子。樣品應(yīng)盡可能分離和純化，以去除多余的雜質(zhì)。

四.防止高效液相色譜柱柱壓過(guò)高

盡管高效液相色譜柱能承受6萬(wàn)的壓力psi(磅/平方英寸)，但過(guò)高和過(guò)大的壓力變化會(huì)縮短色譜柱的使用壽命，預(yù)防的方法是防止色譜柱的使用壽命。

(1)柱壓過(guò)大時(shí)，盡量選擇較小的流速，以免超過(guò)柱最大允許壓力的一半。

(2)當(dāng)流速較大時(shí)，應(yīng)采用流速梯度的方法使流速分步到位。

(3)使用手動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí)，進(jìn)樣閥的轉(zhuǎn)換應(yīng)盡可能快。否則，超過(guò)20%的壓力沖擊很快就會(huì)使柱子報(bào)廢。使用多柱時(shí)，應(yīng)避免在高壓下進(jìn)行柱轉(zhuǎn)換。

五.注意溫度和pH值

硅膠色譜柱的最高使用溫度一般不超過(guò)60℃,以低于40℃適宜，尤其是流動(dòng)相pH接近使用限度時(shí)，應(yīng)降低使用溫度。

如果溫度過(guò)高，會(huì)加速鍵合相的水解和硅膠的溶解，從而改變填料特性、柱床塌陷、柱效和峰形。

目前鍵合硅膠色譜柱標(biāo)注pH適用范圍可達(dá)2~10，但在實(shí)際使用中應(yīng)避免極端pH條件，特別是堿性條件，特別是堿性條件(pH≥8)下使用，如必須在極端使用pH在環(huán)境使用中，可采用以下方法防止柱損傷：

(1)在泵與進(jìn)樣閥之間安裝預(yù)柱(飽和柱)來(lái)飽和流動(dòng)相；

(2)降低使用溫度；

(3)檢測(cè)完成后，立即與所用流動(dòng)混溶。“柔和溶劑”完全清洗。

六.高效液相色譜柱正確及時(shí)的清洗

在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，你應(yīng)該知道柱子里目前是什么樣的溶劑。對(duì)于新的色譜柱，如果沒(méi)有特殊的表示，則是評(píng)估報(bào)告中使用的流動(dòng)相。柱中當(dāng)前的溶劑必須與分析樣品中使用的流動(dòng)相互溶解。如果不能混合，則應(yīng)使用第三種溶劑與兩者混合。

異丙醇是唯一能與各種溶劑混合的試劑，可作為中介流動(dòng)相使用。相反，硅膠柱的適當(dāng)儲(chǔ)存環(huán)境是純甲醇。如果分析流動(dòng)相作為緩沖液2有機(jī)溶劑，可以用甲醇含量較低(20%)的甲醇2水代替原來(lái)的純甲醇，然后分析流動(dòng)相，避免柱內(nèi)鹽的沉淀；

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)使用適當(dāng)?shù)娜軇┣逑聪到y(tǒng)，最終轉(zhuǎn)化為純甲醇清洗。對(duì)于含有緩沖鹽的流動(dòng)相，最好的方法是用流動(dòng)相完全一致但不含緩沖鹽的溶液進(jìn)行清洗，然后逐漸轉(zhuǎn)化為純甲醇清洗。

大多數(shù)人報(bào)道，沖洗液的體積約為柱容量的15~20倍，但最終應(yīng)該是基線是否平直.壓力是否穩(wěn)定決定。

一些制造商的色譜柱表明，流動(dòng)相中有機(jī)相的最低濃度為≥5%，使用時(shí)要注意。