氨基柱作為一種反相色譜柱,在分離純化中具有重要的作用。其固定相由羧酸和胺基構(gòu)成的聚合物,表面含有大量極性官能團,因此能夠有效地分離極性分子。同時,它的內(nèi)部結(jié)構(gòu)具有孔隙,因此可以分離不同大小的分子。
那么,如何正確使用氨基柱進行色譜分離呢?以下是常規(guī)的操作指南:
避免干燥
氨基柱的存儲溫度較高,容易引起干燥。因此,在使用之前,需要將其在無空氣流動的環(huán)境中放置一段時間,讓其恢復到正確的濕度和pH值。如果使用的是新柱,最好在樣品處理前先用一些純?nèi)軇┻M行洗脫。
pH值調(diào)節(jié)
氨基柱的運用中需要注意pH值的影響。不同的物質(zhì)對pH值的要求不同,因此在使用氨基柱之前,需要了解目標分子的pH值范圍,在樣品處理過程中進行調(diào)整。通常來說,只有當樣品的pH值與柱子上的固定相pKa值之差小于1時,才能保證分離效果最佳。
防止污染
在使用氨基柱過程中,需要保護其表面的極性官能團不受污染。因此,在分裝樣品、調(diào)節(jié)pH值、收集洗脫液等操作中,應(yīng)反復檢查是否有其他物質(zhì)進入氨基柱中。此外,在每次使用前,都需要用洗脫溶液或純?nèi)軇┻M行預沖洗,以確保柱內(nèi)無殘留物。
提高分離效率
為了提高分離效率,可以選擇合適的流速和洗脫梯度,并把樣品的體積盡量控制在柱子的吸附容量范圍內(nèi)。如果需要分離的化合物很少,可以考慮使用前列腺素C18柱,以提高分離的靈敏度。此外,對于一些比較難分離的化合物,也可以考慮使用離子交換柱或hilic柱。
后處理
分離完畢后,還需要對洗脫液進行處理。如果液相色譜法使用的是高濃度緩沖液,則可以使用DI水進行稀釋;如果使用的是非緩沖液,則可以通過蒸發(fā)濃縮或減壓濃縮的方法進行洗脫液的濃縮。此外,洗脫液中的有機溶劑也需要安全處理,以免對環(huán)境造成污染。
總之,氨基柱在色譜分離中具有很好的應(yīng)用價值,但要想得到較為理想的結(jié)果,必須要正確使用和維護。希望通過以上內(nèi)容的介紹,能夠?qū)Υ蠹业膶嶒灩ぷ饔兴鶐椭?/p>