液相色譜柱的存儲液,如果沒有特別說明,都是根據評價報告所指出的流動相。在使用之前,請務必確保液相色譜柱的存儲液與待分析樣品的流動相是否相容。對于反相色譜,如果使用高濃度的鹽或緩沖液作為洗脫劑,應首先用約10%左右低濃度的有機相進行洗脫,以過渡一下,否則緩沖液中的鹽會在高濃度的有機相中析出,從而導致色譜柱堵塞。
液相色譜柱升高壓力的原因有以下幾種:
1、前置處理的移動階段
進口濾片會堵塞色譜柱中的雜質,從而使壓力升高。這通常是由于流動相沒有經過濾或雖然經過濾但過濾效果不佳,導致固體雜質停留在濾片上引發(fā)的。
2、樣品的沉淀
當樣品的溶解液與流動相不相容時,進樣進入色譜柱后,有時會由于溶解度下降而發(fā)生沉淀,導致壓力升高。
3、晶體的析出
在使用含有緩沖液的移動相時,緩沖液中的無機鹽有可能會保留在體系中,當它們在新的移動相中的溶解度降低時會析出,導致流體阻力增加和壓力上升。
4、微生物滋生
霉菌會在流動系統(tǒng)、管道或柱子的進口處繁殖生長,堵塞過濾板,增加壓力。因此,使用磷酸鹽緩沖液時通常需要現(xiàn)配現(xiàn)用。
5、溶質吸附
當溶質在柱子表面有很強的吸附能力,并且使用的流動相難以將其清洗干凈時,未被清洗的溶質會不斷積累,導致阻力增加和壓力升高。
6、流動相更換速度較快
當改變流動相體系時,即使不進行更換操作,不同性質且無法相互混合的流動相出現(xiàn)在同一體系中,都可能導致壓力增加。
7、壓力脈沖
系統(tǒng)運行時,可能會出現(xiàn)突然的內部壓力變化。這種壓力脈沖會導致多孔填料破裂和柱床結構微小變形,同時填料微屑長期積累也可能導致柱床阻力上升,從而增加壓力。